期刊简介
本刊以贯彻党和国家的卫生工作方针政策，贯彻理论与实践、普及与提高相结合的办刊方针，以报道国内外妇幼卫生领域及相关医学领域的最新动态、新进展、新技术和新经验，反映国内外妇儿学科领域的临床、教学、科研及防治工作的最新进展，促进妇儿学科领域的学术交流为办刊宗旨。以国内外妇儿疾病的防治、行为心理、计划免疫、营养及健康教育及各科临床医学为主要内容。
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首页>母婴世界杂志
- 杂志名称：母婴世界杂志
- 主管单位：山西省新闻出版局
- 主办单位：山西省出版工作者协会
- 国际刊号：1671-2242
- 国内刊号：14-1288/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：
小鼠OX40融合蛋白的鉴定、优化表达、纯化及单克隆抗体的制备
杜雪梅；刘格；李君；李东盼；孙岩；唐华平；冯永堂
关键词：OX40融合蛋白, 鉴定, 优化表达, 纯化:单克隆抗体
摘要：目的:鉴定、优化表达并纯化小鼠OX40融合蛋白,制备小鼠OX40单克隆抗体.方法:将已构建好的pET32a-OX40重组质粒DNA转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,涂于含Amp平板筛选出阳性克隆,经Western Blotting鉴定融合蛋白,对阳性克隆株通过分别改变IPTG浓度、培养温度及时间条件,获得佳表达条件,采用包涵体纯化法和SDS-PAGE电泳纯化目的蛋白,免疫BalB/C小鼠,融合、筛选杂交瘤阳性克隆,用间接ELISA及Dot-ELISA鉴定克隆化阳性细胞上清,接种小鼠腹腔体内扩增吸取腹水,经滤膜过滤、饱和硫酸胺沉淀及透析步骤纯化腹水中的抗体,用SDS-PAGE电泳分析纯化抗体.结果:转化的质粒经Western Blotting鉴定,证实有目的蛋白表达.改变诱导条件后SDS-PAGE结果表明,在IPTG浓度0.4mM,温度30℃,诱导4h后,融合蛋白的表达量高,采用包涵体纯化法和SDS-PAGE电泳获得纯化目的蛋白,免疫小鼠后成功制备小鼠OX40单克隆抗体.结论:小鼠OX40融合蛋白在BL-21细胞获得成功表达,同时获得其佳表达条件并成功纯化目的蛋白,成功制备小鼠OX40单克隆抗体.
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